Янв 13 2001

ФЕНОМЕН ВЫСВОБОЖДЕНИЯ НЕБЕЛКОВЫХ Sh-ГРУПП

Опубликовано в 02:20 в категории Экология города

ФЕНОМЕН ВЫСВОБОЖДЕНИЯ НЕБЕЛКОВЫХ SH-ГРУПП

ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ БЕЛКОВ ОСТРОЙ ФАЗЫ

СЫВОРОТКИ КРОВИ С АНТИСЫВОРОТКАМИ

И ЕГО ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

В.В. Костюшов*, Л.А. Костюшова*, О.Л. Тымчишин*,

Н.В. Костюшова*, В.А. Ратушненко

  • *Центральный военный клинический госпиталь, г. Одесса

  • Одесский государственный медицинский университет

    Для определения остроты течения заболеваний предложены иммунологические методы количественной оценки острофазовых белков в биологических жидкостях [1]. Однако, до сих пор неизвестны способы оценки их функционального состояния в аналогичных иммунологических реакциях.

    В этом плане представляют интерес литературные данные, в которых сообщается о феномене высвобождения небелковых сульфгидрильных групп (SH-групп) в результате образования иммунных комплексов в реакциях антиген-антитело [2]. Причем, установлено, что по количеству образовавшихся небелковых SH-групп можно оценивать функциональное состояние специфических белков, например, иммуноглобулинов [3].

    Мы не нашли сообщений относительно использования небелковых SH-групп для оценки функционального состояния белков острой фазы, что и послужило основанием для проведения настоящей работы.

    МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

    Обследованы три группы: І группа (контрольная) - 79 практически здоровых доноров; I? группа 39 пациентов с острыми воспалительными процессами; III группа – 34 пациента, у которых были различные хронические заболевания в стадии обострения.

    В сыворотках крови (СК) доноров и пациентов изучали С-реактив-ный протеин (CK~CRP), орозомукоид (CK~Oroso), СЗ-компонент комплемента (CK~СЗ), иммуноглобулины класса M, G, A (соответственно CK~Ig M, CK~Ig G, CK~Ig A) и трансферрин (CK~Transf). Для этого в сыворотки крови обследуемых добавляли диагностические антисыворотки против С-

    реактивного протеина (Anti-CRP) и иммуноглобулинов класса М (Anti~IgM), класса G (Anti~IgG), класса А (Anti~IgA) (производство фирмы КONЕ Instruments, Финляндия), а также против орозомукоида (Anti-Oroso), против трансферрина (Anti-Transf) и против С3-компонента комплемента (Anti~С3) (производство фирмы “Sevac”, Чехия). Получали реакционные смеси: “CK~CRP + Anti-CRP”; “CK~Oroso + Anti-Oroso”; “CK~СЗ + Anti-СЗ”; “CK~Ig M + Anti-Ig M”; “CK~Ig G + Anti-Ig G”; “CK~Ig A + Anti-Ig A”; “CK~Transf + Anti-Transf”, которые термостатировали при 370С – 60 мин.

    Небелковые SH-группы изучали в депротеинизированных сыворотках крови (до их соединения с диагностикумами) и в депротеинизированных реакционных смесях. Для их определения использовали метод амперометрического титрования азотнокислым серебром по [4]. Осаждение (депротеинизацию) белков сыворотки крови и реакционных смесей осуществляли метафосфорной кислотой.

    Исследования проводили на 1-3 день от начала заболевания и затем их повторяли, после лечения больных.

    РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

    Установлено, что как у доноров, так и у пациентов в депротеинизированных сыворотках крови отсутствуют свободные небелковые SH-группы. Не обнаружены они и в депротеинизированных диагностических антисыворотках.

    Данные, представленные в таблице, свидетельствуют, что в депротеинизированных реакционных смесях “CK~СЗ +Anti-СЗ”; “CK~Ig M + Anti-Ig M”; “CK~Ig G +Anti-Ig G”; “CK~Ig A + Anti-Ig A” всегда определяются свободные небелковые SH-группы, как у доноров, так и у пациентов II и III групп. Кроме того, в депротеинизированных реакционных смесях “CK~CRP + Anti-CRP”; “CK~Oroso + Anti-Oroso”; “CK~Transf + Anti-Transf” также обнаружены свободные небелковые SH-группы, но только у пациентов ІI и ІІІ групп, а у доноров они не определяются.

    ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

    Отсутствие свободных небелковых SH-групп в депротеинизированных сыворотках крови и диагностических антисыворотках, до их соединения друг с другом, можно объяснить тем, что они в основном находятся в депонированном состоянии, образуя смешанные дисульфидные связи с белками [5, 6, 7, 8].

    Заслуживает внимание тот факт, что независимо от наличия воспалительного процесса, комплементарное взаимодействие иммуноглобулинов и С-3 компонента комплемента сывороток крови в реакциях in vitro с диагностическими антисыворотками: Anti-Ig M, Anti-Ig G, Anti-Ig A и Anti-СЗ как у доноров, так и у пациентов всегда сопровождается высвобождением небелковых SH-групп в депротеинизированных реакционных смесях.

    Тем не менее, оказалось, что при взаимодействии CK~CRP, CK~Oroso и CK~Transf в реакциях с Anti-CRP, Anti-Oroso и Anti-Transf происходит высвобождение небелковых SH-групп, но только у пациентов ІІ и ІІІ групп, причем в острый период заболевания. После выздоровления у этих пациентов, как и у доноров, в указанных реакционных смесях небелковые SH-группы не определяются.

    Таким образом, установлено, что при патологических процессах происходит радикальная качественная перестройка структурно-функцио-нального состояния белков острой фазы. В результате изменяется молекулярный механизм их взаимодействия с антисыворотками, о чем свидетельствует феномен высвобождения небелковых SH-групп. Поэтому появление небелковых SH-групп можно использовать в диагностических целях - для оценки функционального состояния белков острой фазы.

    Таблица. Содержание небелковых SH-групп в депротеинизированных реакционных смесях

    Депротеинизированные реакционные смеси

    Содержание небелковых SH-групп (M±m, мкмоль/Л)

    Доноры

    Пациенты ІІ группы

    р1

    Пациенты ІІІ группы

    р1

    р2

    СК~IgM + Anti-IgM

    16,48±1,74

    17,73±1,09

    >0,05

    15,74±1,28

    >0,05

    >0,05

    СК~IgG + Anti-IgG

    23,11±1,75

    24,60±1,52

    >0,05

    21,49±1,83

    >0,05

    >0,05

    СК~IgA + Anti-IgA

    16,29±1,91

    17,79±1,25

    >0,05

    15,75±1,39

    >0,05

    >0,05

    CK~СЗ +Anti-СЗ

    8,42±0,92

    9,94±1,24

    >0,05

    8,96±1,07

    >0,05

    >0,05

    CK~CRP +Anti-CRP

    0,00

    6,38±0,83

    6,45±0,55

    >0,05

    CK~Oroso + Anti-Oroso

    0,00

    7,46±0,96

    4,89±0,50

    CK~Transf+Anti-Transf

    0,00

    10,89±1,26

    2,98±0,57

    Р1 - достоверность различий по сравнению с донорами

    Р2 - достоверность различий по сравнению с пациентами II группы

    Литература

    1. Долгов В.В., Шевченко О.П., Лабораторная диагностика нарушений обмена белков / Учебное пособие. Российская медицинская академия последипломного образования – М. – 1997. – 67 с.

    2. Kostyushov V.V. Thiol-selective mechanisms of specific antigen-antibody interactions // "Congress of Pathology and Laboratory Medicine - XX World – IV MERCOSUL – XXXIII BRAZILIAN". San Paulo, Brazil, 17-21 September 1999 – р.27

    3. Kostyushova L.A., Kutkovetc S.L., Baikova S.V The diagnostical value of immunoglobulines\’ functional state evaluation according to thiol-containing analites //"Congress of Pathology and Laboratory Medicine - XX World – IV MERCOSUL – XXXIII BRAZILIAN". San Paulo, Brazil, 17-21 September 1999 – р. 17.

    4. Kolthoff I. M., Harris W. E. Ampermetric Titration of Mercaptan with silver nitrate Using the Rotating Platinum Electrode // Ind. Eng. Chem. Anal. Ed — 1946. — V. 18. - № 3. — P. 161-162.

    5. Barron E. The thiol groups of biological importance // Adv. Enzymol. and Related Subj. Biochem. - 1951. - № 11. - P. 201-206.

    6. Капланский С.Я., Азявчик А.В. Содержание сульфгидрильных групп в отдельных фракциях белков сыворотки у больных с циррозом печени, холециститами и нефритами. Вопр. мед. хим. - 1962. - T. 8. - № 1. - С. 53-58.

    7. Белицер В. А. Макроструктура и денатурационные превраще­ния белков // Укр. бioxiм. журн. - 1962. - Т. 34. - № 2. - С. 290-320.

    8. Friedman M. Cemistry and biochemistry of sulfhydryl group in aminoacides, peptides and proteins. – Oxford – N.Y. - Pergamon Press, 1973. - 80 p.

  • Нет пока ответов

    Комментарии закрыты.