ФЕНОМЕН ВЫСВОБОЖДЕНИЯ НЕБЕЛКОВЫХ Sh-ГРУПП
ФЕНОМЕН ВЫСВОБОЖДЕНИЯ НЕБЕЛКОВЫХ SH-ГРУПП
ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ БЕЛКОВ ОСТРОЙ ФАЗЫ
СЫВОРОТКИ КРОВИ С АНТИСЫВОРОТКАМИ
И ЕГО ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
В.В. Костюшов*, Л.А. Костюшова*, О.Л. Тымчишин*,
Н.В. Костюшова*, В.А. Ратушненко**
*Центральный военный клинический госпиталь, г. Одесса
**Одесский государственный медицинский университет
Для определения остроты течения заболеваний предложены иммунологические методы количественной оценки острофазовых белков в биологических жидкостях [1]. Однако, до сих пор неизвестны способы оценки их функционального состояния в аналогичных иммунологических реакциях.
В этом плане представляют интерес литературные данные, в которых сообщается о феномене высвобождения небелковых сульфгидрильных групп (SH-групп) в результате образования иммунных комплексов в реакциях антиген-антитело [2]. Причем, установлено, что по количеству образовавшихся небелковых SH-групп можно оценивать функциональное состояние специфических белков, например, иммуноглобулинов [3].
Мы не нашли сообщений относительно использования небелковых SH-групп для оценки функционального состояния белков острой фазы, что и послужило основанием для проведения настоящей работы.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Обследованы три группы: І группа (контрольная) - 79 практически здоровых доноров; I? группа 39 пациентов с острыми воспалительными процессами; III группа – 34 пациента, у которых были различные хронические заболевания в стадии обострения.
В сыворотках крови (СК) доноров и пациентов изучали С-реактив-ный протеин (CK~CRP), орозомукоид (CK~Oroso), СЗ-компонент комплемента (CK~СЗ), иммуноглобулины класса M, G, A (соответственно CK~Ig M, CK~Ig G, CK~Ig A) и трансферрин (CK~Transf). Для этого в сыворотки крови обследуемых добавляли диагностические антисыворотки против С-
реактивного протеина (Anti-CRP) и иммуноглобулинов класса М (Anti~IgM), класса G (Anti~IgG), класса А (Anti~IgA) (производство фирмы КONЕ Instruments, Финляндия), а также против орозомукоида (Anti-Oroso), против трансферрина (Anti-Transf) и против С3-компонента комплемента (Anti~С3) (производство фирмы “Sevac”, Чехия). Получали реакционные смеси: “CK~CRP + Anti-CRP”; “CK~Oroso + Anti-Oroso”; “CK~СЗ + Anti-СЗ”; “CK~Ig M + Anti-Ig M”; “CK~Ig G + Anti-Ig G”; “CK~Ig A + Anti-Ig A”; “CK~Transf + Anti-Transf”, которые термостатировали при 370С – 60 мин.
Небелковые SH-группы изучали в депротеинизированных сыворотках крови (до их соединения с диагностикумами) и в депротеинизированных реакционных смесях. Для их определения использовали метод амперометрического титрования азотнокислым серебром по [4]. Осаждение (депротеинизацию) белков сыворотки крови и реакционных смесей осуществляли метафосфорной кислотой.
Исследования проводили на 1-3 день от начала заболевания и затем их повторяли, после лечения больных.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Установлено, что как у доноров, так и у пациентов в депротеинизированных сыворотках крови отсутствуют свободные небелковые SH-группы. Не обнаружены они и в депротеинизированных диагностических антисыворотках.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют, что в депротеинизированных реакционных смесях “CK~СЗ +Anti-СЗ”; “CK~Ig M + Anti-Ig M”; “CK~Ig G +Anti-Ig G”; “CK~Ig A + Anti-Ig A” всегда определяются свободные небелковые SH-группы, как у доноров, так и у пациентов II и III групп. Кроме того, в депротеинизированных реакционных смесях “CK~CRP + Anti-CRP”; “CK~Oroso + Anti-Oroso”; “CK~Transf + Anti-Transf” также обнаружены свободные небелковые SH-группы, но только у пациентов ІI и ІІІ групп, а у доноров они не определяются.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Отсутствие свободных небелковых SH-групп в депротеинизированных сыворотках крови и диагностических антисыворотках, до их соединения друг с другом, можно объяснить тем, что они в основном находятся в депонированном состоянии, образуя смешанные дисульфидные связи с белками [5, 6, 7, 8].
Заслуживает внимание тот факт, что независимо от наличия воспалительного процесса, комплементарное взаимодействие иммуноглобулинов и С-3 компонента комплемента сывороток крови в реакциях in vitro с диагностическими антисыворотками: Anti-Ig M, Anti-Ig G, Anti-Ig A и Anti-СЗ как у доноров, так и у пациентов всегда сопровождается высвобождением небелковых SH-групп в депротеинизированных реакционных смесях.
Тем не менее, оказалось, что при взаимодействии CK~CRP, CK~Oroso и CK~Transf в реакциях с Anti-CRP, Anti-Oroso и Anti-Transf происходит высвобождение небелковых SH-групп, но только у пациентов ІІ и ІІІ групп, причем в острый период заболевания. После выздоровления у этих пациентов, как и у доноров, в указанных реакционных смесях небелковые SH-группы не определяются.
Таким образом, установлено, что при патологических процессах происходит радикальная качественная перестройка структурно-функцио-нального состояния белков острой фазы. В результате изменяется молекулярный механизм их взаимодействия с антисыворотками, о чем свидетельствует феномен высвобождения небелковых SH-групп. Поэтому появление небелковых SH-групп можно использовать в диагностических целях - для оценки функционального состояния белков острой фазы.
Таблица. Содержание небелковых SH-групп в депротеинизированных реакционных смесях
Депротеинизированные реакционные смеси
Содержание небелковых SH-групп (M±m, мкмоль/Л)
Доноры
Пациенты ІІ группы
р1
Пациенты ІІІ группы
р1
р2
СК~IgM + Anti-IgM
16,48±1,74
17,73±1,09
>0,05
15,74±1,28
>0,05
>0,05
СК~IgG + Anti-IgG
23,11±1,75
24,60±1,52
>0,05
21,49±1,83
>0,05
>0,05
СК~IgA + Anti-IgA
16,29±1,91
17,79±1,25
>0,05
15,75±1,39
>0,05
>0,05
CK~СЗ +Anti-СЗ
8,42±0,92
9,94±1,24
>0,05
8,96±1,07
>0,05
>0,05
CK~CRP +Anti-CRP
0,00
6,38±0,83
6,45±0,55
>0,05
CK~Oroso + Anti-Oroso
0,00
7,46±0,96
4,89±0,50
CK~Transf+Anti-Transf
0,00
10,89±1,26
2,98±0,57
Р1 - достоверность различий по сравнению с донорами
Р2 - достоверность различий по сравнению с пациентами II группы
Литература
1. Долгов В.В., Шевченко О.П., Лабораторная диагностика нарушений обмена белков / Учебное пособие. Российская медицинская академия последипломного образования – М. – 1997. – 67 с.
2. Kostyushov V.V. Thiol-selective mechanisms of specific antigen-antibody interactions // "Congress of Pathology and Laboratory Medicine - XX World – IV MERCOSUL – XXXIII BRAZILIAN". San Paulo, Brazil, 17-21 September 1999 – р.27
3. Kostyushova L.A., Kutkovetc S.L., Baikova S.V The diagnostical value of immunoglobulines\’ functional state evaluation according to thiol-containing analites //"Congress of Pathology and Laboratory Medicine - XX World – IV MERCOSUL – XXXIII BRAZILIAN". San Paulo, Brazil, 17-21 September 1999 – р. 17.
4. Kolthoff I. M., Harris W. E. Ampermetric Titration of Mercaptan with silver nitrate Using the Rotating Platinum Electrode // Ind. Eng. Chem. Anal. Ed — 1946. — V. 18. - № 3. — P. 161-162.
5. Barron E. The thiol groups of biological importance // Adv. Enzymol. and Related Subj. Biochem. - 1951. - № 11. - P. 201-206.
6. Капланский С.Я., Азявчик А.В. Содержание сульфгидрильных групп в отдельных фракциях белков сыворотки у больных с циррозом печени, холециститами и нефритами. Вопр. мед. хим. - 1962. - T. 8. - № 1. - С. 53-58.
7. Белицер В. А. Макроструктура и денатурационные превращения белков // Укр. бioxiм. журн. - 1962. - Т. 34. - № 2. - С. 290-320.
8. Friedman M. Cemistry and biochemistry of sulfhydryl group in aminoacides, peptides and proteins. – Oxford – N.Y. - Pergamon Press, 1973. - 80 p.
Схожие публикации: